Yakında

DNA fragmanlarının çoğalması

DNA fragmanlarının çoğalması


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

DNA moleküllerinin restriksiyon enzimleri kullanılarak parçalanması ve jel elektroforezi ile tanınmasıyla, bir sonraki adım elde edilen fragmanın çoğaltılması (klonlanması) ve rekombinant DNA teknolojisine tabi tutulmasıdır.

DNA dizisi çarpma tekniğine denir PCR (polimeraz zincir reaksiyonu).

1980'lerde PCR tekniği, tek bir DNA parçasının binlerce kopyasını yapmak için kullanıldı. Bu teknik, DNA içeren test tüplerinde ve diğer bazı gerekli bileşiklerde kullanılır. primerler (Primer DNA'lar) ve DNA polimeraz enzimi (DNA replikasyonu yapan enzim).

primerler bunlar yaklaşık 20 baz (A, T, C, G) tamamlayıcı olan DNA iplikçikleridir, yani tamamlayıcılık ile çoğaltılacak DNA dizisinin başlangıcına bağlanırlar. Bir DNA molekülü çoğaltılacaksa, çift iplik ayrılmalıdır, böylece iki farklı fakat tamamlayıcı iplik oluşturulur. Her bant çoğaltma için bir şablon görevi görecektir, bu yüzden iki farklı primere ihtiyacımız var (şekle bakın)

PCR tekniği, adım adım

Bir insan hücresinden minimal bir DNA örneği elde edilir.

  1. DNA örneği, replikasyon enzimi (DNA polimeraz), DNA nükleotitleri ve DNA dizisi tamamlayıcı primerleri bir test tüpüne yerleştirilir.
  2. Test tüpü bir PCR makinesine (bir programa göre sıcaklığı yükselten ve düşüren makine) yerleştirilir. Aşağıdaki ısıtma ve soğutma adımları, program tarafından kontrol edilen makinenin içinde gerçekleşir.
  3. Tüp, DNA'nın denatüre edilmesi (çift sarmalın ayrılması) için 94 ° C'ye kadar ısıtılır.

4. Her bir denatüre DNA dizisi yeni tamamlayıcı dizilerin sentezi için bir şablon görevi görür. Bunun için, polimerlerin polimeraz enzimi için primer görevi gören iki basit bandın başlangıcında çaldığı 54 ° C'ye soğutulur.

5. Tüp, şeridin tekrarlanması için 72 ° C'ye (ideal DNA polimeraz çalışma sıcaklığı) ısıtılır. DNA polimeraz, primerin bitiminden sonra, serbest nükleotidleri DNA zincirine bir araya getirerek yerleştirmeye başlar, böylece yeni bir çift iplik oluşturur.