Bilgi

Anaerobik ortamı çok azaltıcı hale getirmek mümkün müdür?

Anaerobik ortamı çok azaltıcı hale getirmek mümkün müdür?


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

Bir anaerob yetiştirmek için mücadele ediyorum (diş eti iltihabı), Kültür koşullarını oksijensiz tutmak için her türlü önlemi alıyorum, koşulların zorunlu bir anaerob mikrobiyal büyümesini engelleyecek kadar azaltıcı olup olmadığını merak ediyordum.

Sıvı ortamı yapmak için aşağıdakileri yapıyorum:

  • Maya özü ile takviye edilmiş TSB
  • artı bir indirgeyici madde olarak 0.5g/L L-sistein HCl
  • artı redoks göstergesi olarak resazurin
  • resazurin tamamen renksiz hale gelene kadar nitrojenle ısı serpin
  • stok çözeltilerden hemin (5 mg/L) ve K1 vitamini (1 mg/L) ekleyin (su içinde 1mL/L hemin, etanol içinde 200uL/L vit K1)
  • bu ortamı, içindeki gazın çıkarıldığı cam tüplere filtre ile enjekte edin (bu, anaerobik bir başlıkta gerçekleşir)
  • tüm malzemeler (şırıngalar, iğneler, filtreler, tüpler) kullanımdan önce anaerobik başlıkta bırakılmış, böylece içinde/üzerlerinde artık oksijen kalmamıştır.
  • 80:10:10 N gaz karışımı için üst boşluğu değiştirin2:CO2:H2

72 saatten sonra @ 37'de herhangi bir büyüme görmüyorumÖC.

Bulduğum diğer protokoller oksijenin çıkarılması konusunda çok daha belirsiz/gevşek, birçoğu sadece sistein eklenmesi gerektiğini ve medyanın kullanılmadan önce kapak gevşek olarak 24 saat anaerobik bir başlıkta inkübe edilmesi gerektiğini söylüyor. Bu, belki de oksijeni çok fazla uzaklaştırdığımı düşünmeme neden oldu.

Ne düşünüyorsun?


Önemli olabilecek pH belirtmediğinizi fark ettim.

Çok fazla indirgeyici madde koyabilir misiniz bilmiyorum (sanmıyorum), ancak disülfid değişim reaksiyonları için denge sabitleri tipik olarak bire yakın olduğundan genellikle büyük bir fazlalık gerekir (bkz. Cleland, 1963).

Ayrıca, aşağıdakilerden herhangi birinin sorununuzla ilgili olup olmadığını bilmiyorum (yine, şüpheliyim), ancak genel olarak indirgeyici ajanlar olarak tiyolleri kullanmanın iki yönü hakkında kısaca yorum yapmak istiyorum.

İlk olarak, tiyollerin oksitlenmiş (disülfid) formu bir protein sülfhidril ile reaksiyona girebilir. Örnek olarak β-merkaptoetanol kullanıldığında (Scopes, 1993, s 320), indirgeyici maddenin proteine ​​(tersinir şekilde) bağlandığı aşağıdakine benzer bir şey meydana gelebilir. Reaktif sülfhidril bir enzim aktif bölgesinde ise, bu inaktivasyona yol açabilir.

$$ce{2 HSCH2-CH2OH + O2 -> HOCH2CH2-S-S-CH2CH2OH + H2O2 ag{1}}$$

$$ce{HOCH2CH2-S-S-CH2CH2OH + HS-{Protein} <=>HSCH2-CH2OH + HOCH2CH2-S-S-{Protein} ag{2}}$$

Belirtildiği gibi, tiyol değişim reaksiyonları için denge sabitleri genellikle birliğe yakındır (Cleland, 1963)., $$ce{R1-SS-R2 + R3-SH <=> R1-SS-R3 + R2-SH ag{ 3}}$$ Bu nedenle, birçok protein kimyacısı, indirgeyici ajan olarak threitolün ditiol analoglarını (dithiothreitol, DTT veya Cleland's reaktifi) veya eritritol kullanmayı tercih eder, çünkü bu bileşiklerin oksitlenmiş formu, denge sabitinin olduğu siklik disülfidlerdir. sağa kaydırılmıştır (bkz. Cleland, 1963).

Bir de istikrar sorunu var.

Solüsyondaki tiyollerin yarı ömrü, aşağıdaki tabloda gösterildiği gibi, belirgin şekilde pH ve sıcaklığa bağlıdır. β-merkaptoetanolün pH 6.5 ve 20°C'de yarı ömrü 100 saatten fazladır, ancak pH 8.5 ve 20°C'de sadece 4 saattir.

Yukarıdaki tablo Stevens, R, Stevens, L & Price, N.C (1983)'den alınmıştır. Protein saflaştırmalarında kullanılan çeşitli tiyol bileşiklerinin stabiliteleri, (şimdi feshedilmiş) Biyokimyasal Eğitim'de yayınlandı. Makalenin tamamı Wiley web sitesinden pdf olarak ücretsiz olarak edinilebilir.


Geisinger Tıbbi Laboratuvarları Mikrobiyoloji Numune Toplama Talimatları

Anaerobik Taşıma Ortamı (ATM): GML Müşteri Hizmetleri'nden sipariş verin. Oda sıcaklığında saklayın. Güneş ışığına maruz bırakmayın. Son kullanma tarihine dikkat edin.

  1. ÖRNEK TOPLAMA
  1. Sıvı veya pürülan örneklerin toplanması.
  1. Steril şırınga ve iğne ile yaranın derinliklerinden örnek alın. Mümkünse, iğne delinmeden önce cilt dezenfekte edilmelidir. Şırıngada sıkışan hava, şırınga ve iğne dik tutularak dışarı atılmalıdır. Şırınganın ucundaki havayı alkole doymuş süngere boşaltın. İğne üzerinde sünger veya kalkan ile bir kenara koyun.
  2. Paketi soyun ve nakliyeyi çıkarın. Kapaktaki kauçuk bağlantı noktasına dokunmayın veya bunları kirletmeyin.
  3. Kauçuk bağlantı noktasından taşıma ortamına 5 ml'ye kadar sıvı enjekte edin. 5 ml'den fazla sıvı elde edilirse, tüm hacmi (50 ml'ye kadar) steril bir vidalı kapaklı numune kabına koyun.
  4. Laboratuvara taşıma.
  5. ATM, steril kap veya steril tüplerde sıvı verilir. Bu, rutin aerobik kültür, mantar ve AFB kültürü için de kabul edilebilir.
  1. Bir doku ATM tüpünün içine kolayca sığacak kadar küçükse, tüpün kapağını açın ve tüpü dik tutarken dokuyu agar yüzeyine bırakın ve tüp kapağını değiştirin.
  2. Bir doku ATM'ye sığmayacak kadar büyükse, bunu steril bir vidalı kapaklı toplama kabı içinde fizyolojik salinle nemlendirilmiş bir parça steril gazlı bez üzerine yerleştirin.
  3. ATM'de veya steril bir kapta gönderilen doku, rutin aerobik, mantar ve AFB kültürü için de kabul edilebilir.

C. ESwab ile toplama (Swab'lar anaerobik kültür için tercih edilen toplama yöntemi değildir).

  1. Paketi soyun ve swabı çıkarın.
  2. Swabı kullanarak, yüzeysel kontaminantlardan kaçınmak için aseptik teknik kullanarak numune alın. Swabın ucunu yaranın derinliklerine kadar uzatmadan önce yara kenarlarını ayırmak veya kapalı bir apsede küçük bir mızrak yapmak gerekebilir. Bitişik cilt kenarlarına dokunmamaya dikkat edin.
  3. Tüpü dik tutarken tüp kapağını çıkarın.
  4. Swabı tüpe yerleştirin ve çentik çizgisinden ayırın.
  5. Kapağı tekrar tüpe yerleştirin ve kapağı sıkın.
  6. Her bir ESwab tüpüne birden fazla swab yerleştirmeyin.
  7. Sıvı ortamı tüpten çıkarmayın.

Tüm örnekleri uygun şekilde etiketlediğinizden ve hemen laboratuvara götürdüğünüzden emin olun.

  1. Hastane içinde: Mümkün olan en kısa sürede Mikrobiyoloji laboratuvarına nakledin. Eğer
    tüp sistemi aracılığıyla gönderilirse, ATM'yi yeterince yastıkladığınızdan emin olun.
    kırılmayı önlemek.
  2. Kurye ile: Mümkün olan en kısa sürede nakliye. Numuneyi odada saklayın
    Aynı gün nakliye mümkün değilse 72 saate kadar sıcaklık.

Referanslar:
Koneman EW, 1988. Renkli Atlas ve Tanısal Mikrobiyoloji Ders Kitabı. JD Lippincott, Philadelphia.


Soyut

Biyoremediasyon, kontamine ortamları ucuz ama etkili bir şekilde eski haline getirme potansiyeline sahiptir, ancak kirli ortamlarda mikroorganizmaların büyümesini ve metabolizmasını kontrol eden faktörler hakkında bilgi eksikliği, genellikle uygulanmasını sınırlar. Bununla birlikte, biyoremediasyon anlayışındaki hızlı ilerlemeler ufuktadır. Araştırmacılar artık biyoremediasyonda önemli olan mikroorganizmaları kültürleme yeteneğine sahipler ve genom destekli deneysel ve modelleme tekniklerinin bir kombinasyonunu kullanarak fizyolojilerini değerlendirebilirler. Ek olarak, yeni çevresel genomik teknikler, henüz kültürlenmemiş organizmalar üzerinde benzer çalışmalar için olanak sunmaktadır. Biyoremediasyona dahil olan mikroorganizmaların aktivitesini tahmin edebilen modelleri mevcut jeokimyasal ve hidrolojik modellerle birleştirmek, biyoremediasyonu büyük ölçüde ampirik bir uygulamadan bir bilime dönüştürmelidir.


Toprak Bilimi: Bir Winogradsky Sütunu Yapın

Tanıtım
Gezegenimiz, yaşamı desteklemek için ihtiyaç duyduğu her şeyi geri dönüştürür ve yeniden kullanır. Biyojeokimyasal döngü adı verilen inanılmaz, dev bir geri dönüşüm sistemi. Winogradsky sütunu denilen şeyi oluşturmak için plastik bir şişe ve çamur kullanarak bunu küçük ölçekte modelleyebilirsiniz. Bu aktivitede kendi Winogradsky sütunlarınızı oluşturacak ve farklı besinlerin dahil edilmesinin hangi toprak mikroorganizmalarının geliştiğini ve hangilerinin başarısız olduğunu nasıl etkilediğini araştıracaksınız.

Arka plan
Yaşamak ve büyümek için organizmalar, tıpkı bizim yaptığımız gibi yemek yiyebilmeleri için yakınlarda belirli besinlere ihtiyaç duyarlar. Bu besinlerin çoğu, besinleri ve diğer kimyasalları Dünya'nın canlı ve cansız kısımları boyunca taşıyan bir biyojeokimyasal döngü boyunca sürekli olarak hareket eder; örneğin, bir zamanlar bir kayada bulunan demir, daha sonra bir bitki tarafından emilebileceği toprağa girebilir ve sonra bir hayvan tarafından yenir. Biyojeokimyasal döngü kapalı bir sistemdir; bu, besinlerin kaybolmadığı veya yaratılmadığı, sürekli olarak yeniden kullanıldığı ve geri dönüştürüldüğü anlamına gelir.

Belirli bir ekosistem, içinde devam eden birkaç biyojeokimyasal döngüye sahip olabilir. Bir ekosistemde geri dönüştürülen bazı önemli besinler oksijen, karbon ve kükürttür. Farklı toprak mikropları, bu ve diğer besin maddelerinin geri dönüştürülmesinde kilit rol oynar. Mikrobiyolog Sergei Winogradsky'nin bu süreçleri incelemek için icat ettiği bir araç, şimdi Winogradsky sütunu olarak adlandırılan uzun, kapalı bir çamurlu toprak sütunuydu. Bunlardan birinin içinde farklı gradyanlar oluşur. Örneğin, zamanla kolonun tepesinde, alt kısmından daha fazla oksijen bulunur. Bu gradyanlar, kolon içinde farklı mikropların nerede yaşayabileceğini etkiler.

Malzemeler
&bull Dört adet temiz plastik su şişesi, her biri 500 mililitre. Pürüzsüz kenarları olan (kıvrık olmayan) ve daha uzun ve daha dar olan şişeler en iyi sonucu verir.
& boğa Makas
& boğa Bıçağı (isteğe bağlı)
&boğa Kalıcı işaretleyici
&boğa Cetvel
&boğa Lastik çizmeler ve çamurlu olabilecek eski giysiler (isteğe bağlı)
&Boğa Çamurlu bir dere, gölet, göl veya bataklığa erişim
& boğa eldiven
& boğa Kürek veya mala
&boğa İki kova
&bull Gazete veya düz kağıt (rendelenmiş)
& boğa Bir yumurta
& boğa İki kase
&bull İki büyük karıştırma kabı
& boğa Ölçüm kabı
Şişelere çamur paketlemek için geniş çubuk
& boğa Ölçüm çay kaşığı
13 watt kompakt floresan ampullü ayarlanabilir masa lambası (isteğe bağlı)
&boğa Bir masa veya masa gibi, ılık oda sıcaklığında (yaklaşık 72 ila 78 derece Fahrenheit) boş bir yüzey. Doğrudan güneş ışığı almamalıdır, ancak masa lambası kullanmıyorsanız, alan çok güneşli bir pencerenin yakınında olmalıdır.
& boğa Plastik sargı
& boğa Plastik çöp poşetleri veya bakkal poşetleri
& boğa Dört lastik bantlar
Boğa Karton kutu veya kahverengi kağıt torba
& boğa El Feneri

Hazırlık
&bull Dört su şişenizdeki tüm ambalajları elinizden geldiğince çıkarın.
&bull Şişelerinizin üst kısımlarını dikkatlice kesin. Bunu yapmak için makas ve bıçak kullanmanız gerekebilir ve bir yetişkinin yardıma ihtiyacı olabilir. Şişenin yukarıya doğru içe doğru kıvrılmaya başladığı yerden üst kısmı kesin. Kesilen kısımları daha sonra huni olarak kullanmak üzere saklayın.
&boğa Kalıcı bir işaretleyici kullanarak, şişenizin yaklaşık yüzde 85'inin dolu olacağı yere küçük bir işaret koyun. Örneğin, şişeniz altı inç uzunluğundaysa, alttan yaklaşık beş inç yukarıya bir işaret koyarsınız. Şişeleri bu seviyeye kadar çamurla dolduracaksınız.
&bull Her şişeye çamuruna ne ekleneceklerini etiketleyin. Birine gazete eklenecek, birine yumurta sarısı eklenecek ve iki tanesi sadece sade çamur tutacak (hiçbir şey eklenmemiş). Sade şişelerden biri karanlıkta, diğer üç şişe ışıkta tutulacaktır.
&bull Go, çamurlu bir dere, gölet, göl veya bataklıktan biraz çamur toplayın. Suyun etrafında dikkatli olun ve daima yetişkin gözetiminde olun. (Önce lastik çizmeler ve çamurlanabilecek eski giysiler giymek isteyebilirsiniz.) Eldivenleri giyin ve bir kovayı, çoğunlukla su yüzeyinin hemen altından toplayarak yaklaşık bir buçuk ila bir galon çamurla doldurun.
&bull Diğer kovada, aynı yerden biraz su (en fazla yarım galon) toplayın.
&bull Kovalarını eve getir ve gerekirse yıkan! (Kullanana kadar kovalarınızı gölgede tutun ki çok ısınmasınlar.)

prosedür
& boğa Bir kasede yaklaşık çeyrek sayfa gazete veya düz kağıdı ince şeritler halinde kesin ve ardından şeritleri küçük dikdörtgenler halinde kesin. Bunlar çamurdaki mikroplar için bir karbon kaynağı olacak. Sizce karbon eklemenin Winogradsky sütununda büyüyen mikropları nasıl etkileyeceğini düşünüyorsunuz?
&boğa İkinci bir kapta bir yumurta sarısı (çiğ veya katı haşlanmış) ekleyin. Sert kaynamışsa, sarısını püre haline getirin. Çiğ yumurtalar salmonella bakterisi içerebileceğinden, işlemden sonra ellerinizi yıkadığınızdan emin olun. Sarısı, çamurdaki mikroplar için bir kükürt kaynağı olacaktır. Kükürt eklemenin Winogradsky sütununda büyüyen mikropları nasıl etkileyeceğini düşünüyorsunuz?
&bull Eldiven giy ve çamurunla kovanı al. Karıştırırken, topladığınız suyu karışımınız milk shake gibi olana kadar yavaş yavaş toprağa ekleyin. Ayrıca karıştırırken çamurdan tüm çubukları, yaprakları ve kayaları çıkardığınızdan emin olun.
& boğa Büyük bir karıştırma kabında iki bardaktan biraz fazla çamur ve yumurta sarısının yaklaşık üçte birini karıştırın. Huni olarak kesilmiş bir şişe üstünü kullanarak, yumurta sarısı ile karıştırılmış çamurun yaklaşık bir inçini yumurta sarısı eklenmiş olarak etiketlenmiş şişeye dökün. Çamuru doldurmak için şişeyi sert bir yüzeye vurun ve çamuru daha fazla doldurmak için geniş bir çubuk kullanın. Bir seferde yaklaşık bir inç çamur eklemeye devam edin ve yaptığınız yüzde 85'lik tam işarete ulaşana kadar paketlemeye devam edin. Şişeyi bir kenara koyun.
& boğa Başka bir büyük karıştırma kabında, kovadaki iki bardaktan biraz daha fazla çamur (su çökmüşse yeniden karıştırın) ve bir çay kaşığı kıyılmış gazete veya kağıt karıştırın. Huni olarak kesilmiş bir şişe üstünü kullanarak, yüzde 85 işaretine gelene kadar doğru etiketlenmiş şişeye bir seferde yaklaşık bir inç çamur dökün ve paketleyin. Şişeyi bir kenara koyun.
&bull Sade çamurlu olarak etiketlemeniz gereken kalan iki şişeyi alın. İki şişeyi huni haline getirin ve doğrudan çamur kovasından (su çökmüşse yeniden karıştırın) yüzde 85 dolana kadar çamurla doldurun.
& boğa Yaklaşık 30 dakika oturduktan sonra, su her şişedeki çamurun üzerinde yaklaşık 0,2 ila 0,8 inç derinliğinde olmalıdır. Dikkatlice daha fazla su ekleyin veya gerektiğinde biraz çıkarın. Üstte en az 0,2 inç boş alan bırakın.
&boğa Masa veya masa üstü gibi, ılık oda sıcaklığında (yaklaşık 72 ila 78 derece F) boş bir düz yüzey bulun. Direkt güneş ışığı almamalıdır. Masa lambası kullanmıyorsanız, alan çok güneşli bir pencerenin yakınında olmalıdır. Yüzeyi korumak için plastik çöp veya alışveriş poşetleri ile örtün.
&bull Şişelerinizi dikkatlice yüzeye taşıyın, dökmemeye dikkat edin! Her şişeyi lastik bantlarla sabitlenmiş plastik sargıyla örtün. Winogradsky sütunlarınız artık test için hazır!
&bull Bir masa lambası kullanmıyorsanız, üç Winogradsky sütununu (ışık alacak) çok fazla ışık alacak, ancak doğrudan ışığa maruz kalmayacak şekilde düzenleyin. Bir lamba kullanıyorsanız, üç sütunu ampulden 20 inç uzakta olacak şekilde düzenleyin. Lamba ile aydınlatılan şişeler için, lambaya bakan şişelerin kenarlarına küçük bir "quotL" yazın. Sizce ışığa bakan taraflarda ne olacak?
&boğa Winogradsky sütununu, oda sıcaklığındaki bir yüzeye ışık almayacak şekilde düz çamurla yerleştirin. Ardından, kolonun üzerine bir karton kutuyu ters çevirin veya şişeye ışık ulaşmayacak şekilde kahverengi bir kağıt torbaya koyun. Sizce ışık almayan kolonda ne olacak?
&bull Sonraki altı ila sekiz hafta boyunca Winogradsky sütunlarını ayarladığınız yerde bırakın. Eğer kullanıyorsanız, masa lambasını günün 24 saati açık tutun. (Plastik sargılı bir kapak gevşerse, sadece bir lastik bantla yeniden takın.) Kolonları haftada bir kez gözlemleyin ve içlerinde renk değişikliği olup olmadığına bakın. Her renklendirme alanı, aynı tür mikroplardan oluşan bir grup olmalıdır. Sütunları gözlemlerken, ışıkları kapatmayı ve sütunlara parlak bir el feneri tutmayı deneyin; bu, renkleri daha iyi görmenize yardımcı olabilir. Sütunlarda hangi renklerin göründüğünü görüyorsunuz? Sütunların neresinde görünüyorlar? Sütunlar birbirinden nasıl farklı görünüyor? Sütunlarda solucan, karides, salyangoz veya başka büyük organizmalar görüyor musunuz? Sütunlar zamanla nasıl değişir? Sonuçlarınızın sütunlara eklenenler (veya eklenmeyenler) ile ne ilgisi olduğunu düşünüyorsunuz?
&Boğa İpucu: Bir ila iki hafta sonra bazı sütunlarda yeşil renklerin göründüğünü görmelisiniz. Bunun için yakından bakmanız gerekebilir. Yeşil renk görmüyorsanız, sütunlar yeterince ışık almıyor olabilir. Onları ışık kaynağına yaklaştırmayı deneyebilirsin.
&Boğa Ekstra: Bu aktiviteyi tekrar yapın, ancak bu sefer her koşul için birden fazla şişeyi test edin. Örneğin, üç Winogradsky sütununu yumurta sarısı ile test edin. Sonuçlarınız ne kadar tekrarlanabilir? Aynı şekilde ayarlanmış farklı sütunlar arasında çok fazla farklılık var mı?
&Boğa Ekstra: Mikrobiyal büyümenin bölgeden bölgeye farklı olup olmayacağını görmek için birkaç farklı çamur veya toprak kaynağını test etmeyi deneyebilirsiniz. Hatta biraz sahil kumu deneyebilirsiniz. Sonuçlarınızın, test ettiğiniz her bölgede yaşayan toprak kalitesi ve mikroplar hakkında size ne söylediğini düşünüyorsunuz?
&Boğa Ekstra: Eşsiz ve zorlu ortamlarda yaşayan mikropları aramak için bazı farklı katkı maddelerini test edin. Örneğin, tuz sevenleri (halofiller olarak adlandırılır) test etmek için bir dizi Winogradsky sütununda artan miktarlarda tuzu test edebilir veya sıcağa (bir ısı çıkışının yakınında) veya soğuğu (buzdolabında) seven mikropları bulmak için sütunları farklı sıcaklıklara yerleştirebilirsiniz. . Daha aşırı koşullarda yaşayan mikropları seçebilir misiniz?

Gözlemler ve sonuçlar
Işıkta kalan sütunlar, ışığa bakan taraflarda yeşil renkli alanlar oluştururken, karanlıktaki sütun koyu kahverengi mi kaldı? Işıktaki üç sütun birbirinden biraz farklı renk desenleri mi yarattı?

Zamanla Winogradsky sütunlarında farklı besinlerin gradyanları oluşmuş olmalıdır. Bu gradyanlar, kolonlar içinde farklı mikropların büyüdüğü yerleri etkiler. Örneğin, zamanla bir sütunun tepesinde, altta olduğundan daha fazla oksijen bulunur ve bu, oksijeni tolere edebilen veya oksijen üretebilen mikropların üstte olacağı anlamına gelir. Serbest oksijeni tolere edemeyen mikroplar (anaerobik bakteri olarak adlandırılır) daha da aşağıda olacaktır. Benzer şekilde, enerji üretmek için (fotosentez veya benzeri bir süreçle) ışığa ihtiyaç duyan mikropların, kolonda ışık alabilecekleri yerde yaşamaları gerekecektir.

Yaklaşık bir ila iki hafta sonra, sütunların ne kadar ışık aldığına bağlı olarak, aydınlatılan taraflarda ışık alan sütunlarda bir miktar yeşil renk görünmelidir. Bunun nedeni çoğunlukla ışığa ihtiyaç duyan siyanobakteriler ve alglerdir. Karanlıktaki sütun koyu kahverengi kalmalıdır. Yumurta sarısı bulunan sütunda, zamanla tabana yakın yerlerde daha koyu yeşil, mor ve/veya siyah renklerin geliştiğini görmüş olabilirsiniz ve bu renkler belirli anaerobik bakteri grupları olabilir: yeşil kükürt bakterileri, mor kükürt bakterileri ve sülfat azaltan bakteriler , sırasıyla. Sülfat azaltan bakteriler aslında kükürt yer ve yeşil ve mor kükürt bakterileri tarafından yenen hidrojen sülfür gazı üretir. Gazetenin bulunduğu sütunda, orta kısımlara yakın kahverengi, turuncu, kırmızı veya mor alanlar görmüş olabilirsiniz ve bu renkler, gelişmek için bir karbon kaynağına ihtiyaç duyan mor kükürt olmayan bakteri grupları olabilir. Suda solucanlar, salyangozlar, karidesler veya diğer küçük organizmalar görmüş olabilirsiniz, ancak yumurta sarılı şişede muhtemelen (eğer varsa) çok değil, çünkü hidrojen sülfür çoğu organizma için zehirlidir!

Temizlemek
Ellerinizi ve çiğ yumurta ile temas eden her şeyi yıkadığınızdan emin olun, çünkü bunlar salmonella taşıyabilir. Ayrıca çamura dokunduktan sonra ellerinizi yıkayın. Winogradsky sütunlarınızla işiniz bittiğinde, izin alarak çamuru dışarıya dökebilirsiniz (örneğin bir kompost makinesine veya çamurlu bir alana geri).

Keşfetmek için daha fazlası
NASA Quest'ten Winogradsky Sütunu Video Gösterimi Oluşturma
Winogradsky Sütunu, Mikrobiyal Yaşam
Winogradsky Sütunları, Pennsylvania Eyalet Üniversitesi'nden
Science Buddies'ten Bir Toprak Hayvanat Bahçesi Yetiştirmek

Bu aktivite, Science Buddies ile ortaklaşa size getirildi


Elektron taşıma zinciri

Glikozdan çoğu ATP, elektron taşıma zincirinde üretilir. Hücresel solunumun doğrudan oksijen tüketen tek kısmıdır, ancak bazı prokaryotlarda bu anaerobik bir yoldur. Ökaryotlarda bu yol, iç mitokondriyal zarda gerçekleşir. Prokaryotlarda plazma zarında meydana gelir.

Elektron taşıma zinciri, zar boyunca 4 protein ve bir proton pompasından oluşur. Bir kofaktör elektronları I-III proteinleri arasında mekik dokur. NAD tükenirse, I'yi atlayın: FADH2 II'de başlar. Kemiozmozda, bir proton pompası, mitokondrinin içinden dışarıya hidrojenleri alır, bu "motoru" döndürür ve fosfat grupları buna bağlanır. Hareket, ADP'den ATP'ye değişir ve aerobik glikoz katabolizmasından elde edilen ATP'nin %90'ını oluşturur.


Tartışma—biyokütlenin nicelleştirilmesi için analitik yaklaşımlar

Bir yetiştirme sırasında mikrobiyal büyüme izlenmelidir. Biyokütle ölçümü çevrimdışı, çevrimiçi ve/veya çevrimiçi yaklaşımlar kullanılarak hedeflenebilir. Mikroskobik numaralandırma, elektronik numaralandırma ve FACS dahil olmak üzere çevrimdışı doğrudan hücre sayımının kullanılması, hücre sayısını belirlemek için yalnızca temsili bir numune hacmi kullanılmasına rağmen, sıvı ortamdaki mikropları sayma olasılığını ifade eder. Doğrudan hücre sayma teknikleri, ışık saçılımı tekniğine kıyasla bulanıklık gerektirmeden sıvı ortamdaki mikropların belirlenmesini kolaylaştırır. İdeal koşullar altında, ortam özellikleri ortam içindeki mikropların miktarını etkilememelidir, ancak ortam bileşenleri mikropların nicelenmesini engelleyebilir, örn. çürütücü veya gübre numuneleri, çünkü bunlar çoğunlukla karanlık ve yüksek viskozitelidir. Karanlık veya viskozitenin üstesinden gelmek için, daha sonra hücre miktarı açıklanırken dikkate alınması gereken numuneler seyreltilebilir. Seyreltme uygulanamıyorsa, substrat tüketimine, ürün oluşumuna veya biyokütle canlılığı araştırmalarına dayanan dolaylı biyokütle belirleme teknikleri kullanılabilir. Ayrıca, karmaşık ortam bileşikleri veya polimerik maddeler de uygun nicelemeyi engelleyebilir (Reischl ve diğerleri 2018b). Mikroskobik numaralandırma, elektronik numaralandırma ve FACS'den daha uygun maliyetlidir, ancak hata duyarlılığı artar. En olası sayı tekniği ile büyümenin belirlenmesi kolaydır. Doğrudan hücre sayımına göre bazı dezavantajları olmasına rağmen, olduğu gibi, kontaminasyonlar tespit edilemez, hücreler sayılmaz ve sadece canlı hücre miktarı tahmin edilir. Katı ortam üzerinde büyüme tayini, koloni sayımı yoluyla gerçekleştirilebilir. Koloni sayımı, gerçek hücre numarasının açıklanmasına izin vermez. Bunun yerine büyüme, sayılması gereken kolonilerle gösterilir. Kolonileri saymak yerine yaş ve kuru ağırlık tayini açıklanabilir. Bu yöntem, yalnızca ağırlık artışı veya azalması hakkında bir fikir verir ve hücre sayısının doğru bir şekilde belirlenmesini sağlamaz. Ek olarak, OD ölçümleri yapılmalıdır. OD ölçümleri yapılırken, ortam absorpsiyonu da dikkate alınmalıdır. Amaca ve mevcut bütçeye bağlı olarak farklı uygulamalar mümkündür.

Çevrimiçi biyokütle ölçümleri, mikrobiyal büyümeyi gerçek zamanlı olarak izleme olanağı sağlar. Optik sensörler hücreleri doğrudan algılar, bu nedenle optik sensörler tarafından üretilen sinyaller, hücre morfolojisine güçlü bir şekilde bağlıdır ve bu da hatalı yanıtlar üretebilir. Floresan optik sensörler, mikroplar tarafından yayılan ömür boyu floresansı ölçerken, burada sadece canlı mikroplar tespit edilebilir (Coppella ve Rao 1990 Farabegoli et al. 2003). Düşük frekanslı elektrokimyasal empedans spektroskopisi (EIS), yetiştirme sırasında canlı hücre konsantrasyonlarını izlemek için çevrimiçi bir işlem aracı olarak kullanılabilir. Mikrobiyal büyüme, ekim işlemi sırasında biyokütle artışını tahmin etmek için bir modelleme stratejisi kullanılarak da ölçülebilir. Bu strateji, her parametrenin (örneğin biyokütle, substrat ve ürün) tek bir cihaz tarafından algılanması gerekmediğinden düşük maliyetlidir. Yetiştirme kaplarında ölçüm cihazları için alan sınırlı olduğundan, bu modelleme stratejisi yetiştirme sürecinin izlenmesini iyileştirebilir. ADM1 modeli, anaerobik çürütme biyoproseslerinin modellenmesi için özel olarak geliştirilmiştir. Bu modelleme stratejisi iyi uygulanmış ve daha fazla ilerleme amaçlanmıştır.


Kükürt İndol Motilite Ortamı (SIM)


Bu bir diferansiyel ortamdır. Bir organizmanın birkaç şey yapma yeteneğini test eder: kükürdü azaltmak, indol üretmek ve agarda yüzmek (hareketli olmak). SIM, üyelerini ayırt etmek için yaygın olarak kullanılır. enterobakterigiller.

Kükürt H'ye indirgenebilir2S (hidrojen sülfür) ya amino asit sisteinin sistein desülfüraz enzimi tarafından katabolizması ya da anaerobik solunumda tiyosülfatın indirgenmesi ile. Hidrojen sülfür üretilirse ortamda siyah bir renk oluşur. Proteus mirabilis H için pozitif2S üretimi. En solda gösterilen organizma, hidrojen sülfür üretimi için pozitiftir.

Triptofanaz enzimine sahip bakteriler, amino asit olan triptofanı indole dönüştürebilir. İndol, eklenen Kovac's reaktifi ile reaksiyona girerek kırmızı renkli (indol +) rosindol boyası oluşturur. Escherichia koli indol pozitiftir. Soldan ikinci resimdeki organizma E. coli'dir ve indol pozitiftir.

SIM tüpleri, tüpün dibine tek bir bıçakla aşılanır. Bir organizma hareketliyse, büyüme bıçaklama işaretinden yayılır ve tüm tüpün bulanık görünmesine neden olur. Pseudomonas aeruginosa ve gerginliği Proteus mirabilis birlikte çalıştığımız hareketlidir.


Testosteron - Ne Yapar ve Ne Yapmaz?

Testosteron denilince aklınıza ne geliyor? Maço erkek? Agresif, sabırsız, A tipi davranış mı? Yol öfkesi? Şiddet?

Testosteronun kötü davranıştaki rolü büyük ölçüde bir efsanedir. Dahası, testosteron sağlık ve hastalıkta sizi şaşırtabilecek başka önemli roller oynar. Örneğin, testosteronun prostat kanserinde önemli bir oyuncu olduğunu biliyor muydunuz? Yoksa kadınların da testosterona mı ihtiyacı var? Erkeklerin kötü davranmasından daha çok testosteron var.

Testosteronun Rolü

Testosteron erkeklerde ana seks hormonudur ve aşağıdakiler gibi bir dizi önemli rol oynar:

  • Penis ve testislerin gelişimi
  • Ergenlik döneminde sesin kalınlaşması
  • Yaşamın ilerleyen dönemlerinde ergenlik döneminde başlayan yüz ve kasık kıllarının görünümü, kelleşmede rol oynayabilir.
  • Kas büyüklüğü ve gücü
  • Kemik büyümesi ve gücü
  • Seks dürtüsü (libido)
  • Sperm üretimi

Çok az testosteronlu ergen erkek çocuklar normal erkekleşme yaşamayabilir. Örneğin, cinsel organlar büyümeyebilir, yüz ve vücut kılları az olabilir ve ses normal olarak derinleşmeyebilir.

Testosteron ayrıca normal ruh halinin korunmasına yardımcı olabilir. Bu hormonun henüz keşfedilmemiş başka önemli işlevleri de olabilir.

Beynin tabanındaki hipofiz bezine beyinden gönderilen sinyaller erkeklerde testosteron üretimini kontrol eder. Hipofiz bezi daha sonra testosteron üretmek için sinyalleri testislere iletir. Bir "geri bildirim döngüsü", kandaki hormon miktarını yakından düzenler. Testosteron seviyeleri çok yükseldiğinde, beyin, üretimi azaltmak için hipofiz bezine sinyaller gönderir.

Testosteronun sadece erkeklerde önemli olduğunu düşünüyorsanız yanılıyorsunuz. Testosteron yumurtalıklarda ve adrenal bezde üretilir. Kadınlarda bulunan birkaç androjenden (erkek cinsiyet hormonları) biridir. Bu hormonların aşağıdakiler üzerinde önemli etkileri olduğu düşünülmektedir:

  • yumurtalık fonksiyonu
  • Kemik gücü
  • Normal libido dahil cinsel davranış (kanıtlar kesin olmasa da)

Testosteron (diğer androjenlerle birlikte) ve östrojen arasındaki uygun denge, yumurtalıkların normal çalışması için önemlidir. Spesifikler belirsiz olsa da androjenlerin normal beyin işlevinde (ruh hali, cinsel dürtü ve bilişsel işlev dahil) önemli bir rol oynaması mümkündür.

Biliyor musun?

Testosteron vücutta kolesterolden sentezlenir. Ancak yüksek kolesterole sahip olmak, testosteronunuzun yüksek olacağı anlamına gelmez. Testosteron seviyeleri, bunun gerçekleşmesi için beyindeki hipofiz bezi tarafından çok dikkatli bir şekilde kontrol edilir.

Çok Fazla Testosteronun Tehlikeleri

Çok fazla doğal olarak oluşan testosterona sahip olmak, erkekler arasında yaygın bir sorun değildir. İnsanların testosteron fazlalığının bariz kanıtlarını düşünebilecekleri göz önüne alındığında bu sizi şaşırtabilir: yol öfkesi, Küçükler Ligi maçlarında babalar arasında kavga ve cinsel ilişki.

Bunun bir kısmı, "normal" testosteron seviyelerini ve "normal" davranışı tanımlamanın zorluğundan kaynaklanıyor olabilir. Testosteronun kan seviyeleri zamanla ve hatta bir gün boyunca önemli ölçüde değişir. Ek olarak, testosteron fazlalığının bir belirtisi gibi görünen (aşağıya bakınız) aslında bu hormonla ilgisiz olabilir.

Aslında, erkeklerde anormal derecede yüksek testosteron seviyeleri hakkında bildiklerimizin çoğu, kas kütlesini ve atletik performansı artırmak için anabolik steroidler, testosteron veya ilgili hormonları kullanan sporculardan gelir.

Erkeklerde anormal derecede yüksek testosteron seviyeleri ile ilişkili sorunlar şunları içerir:

  • Düşük sperm sayısı, testislerin küçülmesi ve iktidarsızlık (garip görünüyor, değil mi?)
  • Kalp kası hasarı ve artan kalp krizi riski
  • İdrar yapma zorluğu ile prostat büyümesi
  • Karaciğer hastalığı
  • Akne
  • Bacakların ve ayakların şişmesi ile sıvı tutulması
  • Kilo alımı, kısmen artan iştahla ilgili olabilir
  • Yüksek tansiyon ve kolesterol
  • Uykusuzluk hastalığı
  • baş ağrısı
  • Artan kas kütlesi
  • Artan kan pıhtılaşması riski
  • Ergenlerde bodur büyüme
  • Karakteristik olmayan saldırgan davranış (iyi çalışılmamış veya açıkça kanıtlanmamış olsa da)
  • Ruh hali değişimleri, öfori, sinirlilik, bozulmuş muhakeme, sanrılar

Kadınlar arasında, yüksek testosteron seviyesinin belki de en yaygın nedeni polikistik over sendromudur (PCOS). Bu hastalık yaygındır. Premenopozal kadınların %6 ila %10'unu etkiler.

PCOS'lu kadınların yumurtalıkları birden fazla kist içerir. Semptomlar düzensiz dönemler, doğurganlığın azalması, yüzde, ekstremitelerde, gövde ve kasık bölgesinde aşırı veya kaba saç, erkek tipi kellik, koyu, kalın cilt, kilo alımı, depresyon ve anksiyeteyi içerir. Bu sorunların çoğu için mevcut bir tedavi, erkek cinsiyet hormonlarının etkisini engelleyen bir diüretik (su hapı) olan spironolaktondur.

Hastalık veya uyuşturucu kullanımı nedeniyle testosteron düzeyi yüksek olan kadınlarda, erkeklerin yaşayabileceği birçok sorunun yanı sıra meme boyutunda küçülme ve ses kalınlaşması da görülebilir.

Çok Az Testosteron

Son yıllarda araştırmacılar (ve ilaç şirketleri), özellikle erkekler arasında testosteron eksikliğinin etkilerine odaklandılar. Aslında, erkekler yaşlandıkça, testosteron seviyeleri, menopoza neden olan östrojendeki nispeten hızlı düşüşün aksine, her yıl yaklaşık %1 ila %2 arasında çok yavaş bir şekilde düşer. Testisler daha az testosteron üretir, hipofizden testislere testosteron yapmalarını söyleyen daha az sinyal gelir ve bir protein (seks hormonu bağlayıcı globulin (SHBG) adı verilen) yaşla birlikte artar. Tüm bunlar, testosteronun aktif (serbest) formunu azaltır. 45 yaşın üzerindeki erkeklerin üçte birinden fazlasının testosteron seviyeleri normal olarak kabul edilenden daha düşük olabilir (ancak daha önce belirtildiği gibi optimal testosteron seviyelerini belirlemek zor ve biraz tartışmalıdır).

Yetişkin erkeklerde testosteron eksikliği belirtileri şunları içerir:

  • Azaltılmış vücut ve yüz kılları
  • Kas kütlesi kaybı
  • Düşük libido, iktidarsızlık, küçük testisler, azalmış sperm sayısı ve kısırlık
  • Artan meme boyutu
  • sıcak basmalar
  • Sinirlilik, zayıf konsantrasyon ve depresyon
  • Vücut kıllarının dökülmesi
  • Kırılgan kemikler ve artan kırık riski

Testosteron eksikliği olan bazı erkeklerin, testosteron replasmanı aldıklarında düzelecek olan düşük testosteronlarıyla ilgili semptomları veya durumları vardır. Örneğin, osteoporozlu ve düşük testosteronlu bir adam, testosteron replasmanı ile kemik gücünü artırabilir ve kırık riskini azaltabilir.

Şaşırtıcı olduğu kadar, kadınlar testosteron eksikliği semptomlarından da rahatsız olabilir. Örneğin, hipofiz bezindeki hastalık, adrenal bez hastalığından testosteron üretiminin azalmasına neden olabilir. Düşük libido, azalmış kemik gücü, zayıf konsantrasyon veya depresyon yaşayabilirler.

Biliyor musun?

Düşük testosteronun o kadar da kötü bir şey olmadığı zamanlar vardır. En yaygın örnek muhtemelen prostat kanseridir. Testosteron, prostat bezini ve prostat kanserini büyümesi için uyarabilir. That's why medications that lower testosterone levels (for example, leuprolide) and castration are common treatments for men with prostate cancer. Men taking testosterone replacement must be carefully monitored for prostate cancer. Although testosterone may make prostate cancer grow, it is not clear that testosterone treatment actually causes cancer.

Diseases and Conditions That Affect Testosterone

Men can experience a drop in testosterone due to conditions or diseases affecting the:

  • Testes – direct injury, castration, infection, radiation treatment, chemotherapy, tumors
  • Pituitary and hypothalamus glands – tumors, medications (especially steroids, morphine or related drugs and major tranquilizers, such as haloperidol), HIV/AIDS, certain infections and autoimmune conditions

Genetic diseases, such as Klinefelter syndrome (in which a man has an extra x-chromosome) and hemochromatosis (in which an abnormal gene causes excessive iron to accumulate throughout the body, including the pituitary gland) can also affect testosterone.

Women may have a testosterone deficiency due to diseases of the pituitary, hypothalamus or adrenal glands, in addition to removal of the ovaries. Estrogen therapy increases sex hormone binding globulin and, like aging men, this reduces the amount of free, active testosterone in the body.

Testosterone Therapy

Currently, testosterone therapy is approved primarily for the treatment of delayed male puberty, low production of testosterone (whether due to failure of the testes, pituitary or hypothalamus function) and certain inoperable female breast cancers.

However, it is quite possible that testosterone treatment can improve symptoms in men with significantly low levels of active (free) testosterone, such as:

  • genelleştirilmiş zayıflık
  • Düşük enerji
  • Disabling frailty
  • Depresyon
  • Problems with sexual function
  • Problems with cognition.

However, many men with normal testosterone levels have similar symptoms so a direct connection between testosterone levels and symptoms is not always clear. As a result, there is some controversy about which men should be treated with supplemental testosterone.

Testosterone therapy may make sense for women who have low testosterone levels ve symptoms that might be due to testosterone deficiency. (It's not clear if low levels olmadan symptoms are meaningful treatment risks may outweigh benefits.) However, the wisdom and effectiveness of testosterone treatment to improve sexual function or cognitive function among postmenopausal women is unclear.

People with normal testosterone levels are sometimes treated with testosterone at the recommendation of their doctors or they obtain the medication on their own. Some have recommended it as a "remedy" for aging. For example, a study from Harvard Medical School in 2003 found that even among men who started out with normal testosterone results noted loss of fat, increased muscle mass, better mood, and less anxiety when receiving testosterone therapy. Similar observations have been noted among women. However, the risks and side effects of taking testosterone when the body is already making enough still discourages widespread use.

Alt çizgi

Testosterone is so much more than its reputation would suggest. Men and women need the proper amount of testosterone to develop and function normally. However, the optimal amount of testosterone is far from clear.

Checking testosterone levels is as easy as having a blood test. The difficult part is interpreting the result. Levels vary over the course of the day. A single low level may be meaningless in the absence of symptoms, especially if it was normal at another time. We need more research to know when to measure testosterone, how best to respond to the results and when it's worthwhile to accept the risks of treatment.

Image: Zerbor/Dreamstime


UV-Hydrogen Peroxide Processes

2.6.4 Dyes

Azo dyes are hard to be biodegraded in conventional biological wastewater treatment processes. A successful approach to treat these contaminants in water is their mineralization by AOPs, mainly UV/H 2Ö2.

Chang et al. (2010) proposed a kinetic model for dye decomposition, which consisted of varying peroxide concentration, dye concentration, pH and UV irradiation power. They considered pseudo-steady state for hydroxyl and hydroperoxyl free radicals and calculated reaction rates in different pathways thus validating the model with coefficients found in literature, and using nonlinear regression. The main conclusion of this evaluation was that with increasing H2Ö2 concentration or dye concentration, the reaction rate could be increased, but it can also accelerate the consumption of hydroxyl radicals and hinder the process, if the concentrations are too high.


Referanslar

  1. Bailey & Scott’s Diagnostic Microbiology 13th Edition: Citrate Utilization
  2. Clinical Microbiology Procedures Handbook 2nd Edition: Citrate Utilization Test (Simmons)
  3. Microbe Online
  4. Hardy Diagnostics
  5. Your Article Library
  6. Austin Community College
  7. University of Windsor

1 thought on &ldquoCitrate Utilization Test- Principle, Media, Procedure and Result&rdquo

Hi, may I know what might be the possible reason that e coli caused the blue color of the citrate test ?